PROLAB 77 / 2014

Titlul proiectului:

Cercetari inovative, multidisciplinare de investigare a efectelor probiotice ale unor noi tulpini de bacterii lactice si consortii

Acronim: PROLAB
Contract: 77/2012
Program: Parteneriate Proiecte Colaborative de Cercetare aplicativa – Competitia 2011
Autoritatea Contractantă: Unitatea Executivă pentru Finanţarea Învăţământului Superior, a Cercetării, Dezvoltării şi Inovării
Cod proiect: PN-II-PT-PCCA-2011-3.1-0969
Perioada de derulare: 36 luni
Bugetul proiectului: 2000000 lei
Project title

Inovative, multidisciplinary research to investigate the probiotic effects of new lactic acid bacteria strains and consortia

Acronim: PROLAB
Contract: 77/2012
Programme: PARTNERSHIPS IN PRIORITY DOMAINS
Financing institution: National Council of Scientific Research in Higher Education
Project code: PN-II-PT-PCCA-2011-3.1-0969
Running time: 36 months
Project budget: 2000000 lei

INFORMATII PROIECT
Rezumat
Rezistenţa/multirezistenţa la antibiotice a tulpinilor bacteriene reprezintă o problemă majoră de sănătate publică atât în România cât şi la nivel mondial. În România există o tendinţă de creştere a incidenţei infecţiilor cu tulpini bacteriene înalt rezistente la antibiotice, tendinţă accentuată şi de  producerea de biofilme bacteriene la nivelul ţesuturilor sau a biomaterialelor utilizate în medicină. În ţara noastră problema dezvoltării de strategii alternative de prevenire şi tratament a infecţiilor cu tulpini bacteriene multirezistente sau  formatoare de biofilme este mai puţin studiată, în ciuda potenţialului aplicativ ridicat în biomedicină, cât şi a utilităţii acestor strategii în refacerea microbiotei normale după impactul negativ al administrării de antibiotice. Una dintre alternativele la tratamentele convenţionale este reprezentată de utilizarea produselor probiotice, care prin administrare în cantităţi adecvate conferă efecte benefice sănătăţii umane. Pentru utilizarea optimă a microorganismelor probiotice este necesară înţelegerea mecanismelor prin care acestea acţionează. Selecţia unei tulpini în vederea includerii ei într-un preparat probiotic trebuie realizată pe baza capacităţii acesteia de a induce o îmbunătăţire a răspunsului organismului gazdei fără a modifica însă homeostazia intestinală. Obiectivul principal al acestui proiect implică realizarea de studii complexe asupra tulpinilor bacteriene cu potenţial probiotic (bacterii lactice nou izolate) şi a consorţiilor bacteriene în vederea îmbunătăţirii protocoalelor experimentale privind selecţia optimă a probioticelor pentru uz uman, pe baza activităţii antiinfecţioase şi imunomodulatoare a acestora.

Plan de realizare

Etape/ Denumirea Activităţii
Partener implicat
Data de finalizare a etapei
Rezultate asteptate
Etapa I - 2012
Caracterizarea microbiologica compelxa a tulpinilor de bacterii lactice (BL) nou izolate
UB, IBB
15 dec 2012
Obtinerea unui stoc de bacterii lactice caracterizate din punct de vedere microbiologic
Etapa II - 2013
Caracterizarea activitatii probiotice a tulpinilor de BL utilizand metode conventionale si noile metodologii implementate
UB, IBB, INCDSB, USAMVB
15 dec 2013
Tulpini de BL caracterizate din punct de vedere al potentialului probiotic
Etapa III – 2014
Investigarea interactiunilor dintre consortii de bacterii lactice probiotice, celulele epiteliale şi imunitare
UB, IBB, INCDSB, USAMVB
15 dec 2014
Obtinerea unui consortiu de BL cu efect probiotic

Etapa IV – 2015
Evaluarea functionalitatii consortiului bazat pe tulpini de BL
UB, IBB
12 iul 2015
Obtinerea unui produs probiotic complex

PROJECT INFORMATIONS
 Abstract
The emergence of bacterial resistance and multiresistance to antibiotics represent a major public health problem in Romania and also in the entire world. In Romania, there is an increasing incidence of infections with bacterial strains highly resistant to antibiotics, whose prognosis is often worsened by bacterial biofilms formed on tissues and biomaterials used in medicine. In our country, the implementation of some alternative strategies for the prevention and treatment of infections with multiresistant and biofilm forming bacteria is less studied, despite their great application potential in biomedicine and their utility in the recovery of the normal microbiota eubiosis state, after antibiotics treatment negative impact on bacterial communities. One of the most viable alternatives is the administration of probiotics products which by administration in adequate amounts confer a health benefit on human organism. For an optimal use of the probiotic microorganisms, the mechanisms by which they work should be better  understood. The selection of an appropriate probiotic strain for its inclusion in a probiotic product should be made on the basis of its capacity to induce an improved host response without modification of the intestinal homeostasis.
The main goal of this project imply complex studies of probiotic strains (lactic acid bacteria newly isolated) and multispecific consortium in order to improve the experimental protocol for the optimal selection of human use probiotics, based on their anti-infective and immunomodulatory activities.

 Work plan

Phase title
Involved partners
Completion date
Expected results
Phase  I - 2012
Complex microbial characterization of newly isolated lactic acid bacteria (LAB) stains
UB, IBB
15.12. 2012
Experimental work will allow us to obtain a stock of lactic acid bacteria characterized in terms microbiologic traits
Phase II - 2013
Characterization of probiotic activity of LAB strains using conventional and newly implemented methodology
UB, IBB, INCDSB, USAMVB
15.12. 2013
The works included in the second phase will make it possible us to characterize these LAB strains with probiotic potential.
Phase III – 2014
Investigation of the crosstalk between probiotics consortium, epithelial and immune cells
UB, IBB, INCDSB, USAMVB
15.12. 2014
Research activities from this phase will allow us to obtain a LAB strains consortium with probiotic effect.

Phase IV – 2015
Assessment of functionality of probiotic LAB strain consortium
UB, IBB
12.07.2015
To obtain a complex probiotic product characterized in terms of functionality and stability.

Parteneri in proiect:
Coordonator: Universitatea din Bucuresti, Faculatea de Biologie - Departamentul de Genetica - UB 
Date de contact:  Bd. Mihail Kogălniceanu nr. 36 - 46,  sector 5, Bucuresti, Cod 050107 , tel: 0213077300, fax: 0213077354, e-mail: cercetare@unibuc.ro 
Director de proiect: Lector Dr. Diana Pelinescu (nascuta Smarandache)

Partener 1: Institutul de Biologie Bucuresti - IBB
Date de contact: Splaiul Independenţei nr. 296, Sector 6, Bucureşti, Cod 060031, tel: 021 221 92 02 fax: 021 221 90 71, e-mail: biologie@ibiol.ro
Responsabil din partea partenerului: CSI Dr. Medana Zamfir

Partener 2: Institul National de Cercetare Dezvoltare Stiinte Biologice Bucuresti - INCDSB
Date de contact: Splaiul Independentei nr. 296, sector 6, Bucuresti, Cod 060031, tel: 0212207780; 0212200900;  fax: 0212207695; 0212200900, e-mail: office@dbio.ro,
Responsabil din partea partenerului: CSII Dr. Gabriela Paun

Partener 3: Universitatea de Stiinte Agronomice si Medicina Veterinara Bucuresti - USAMVB
Date de contact: Bd. Mărăşti nr. 59, Bucuresti,  Cod 011464, tel: 0 (21) 318 22 66, fax: 0 (21) 318 28 88, e-mail: post@info.usamv.ro
Responsabil din partea partenerului:Lecturer Dr. Emanuel Vamanu
Project partners:
Coordinator: University of Bucharest, Faculty of Biology, Department of Genetics
Project director: Lecturer Dr. Diana Pelinescu (maiden name Smarandache)
Partner 1: Institute of Biology Bucharest
Team leader: CSI Dr. Medana Zamfir
Partner 2: National Institute of Development – Research in Biological Science Bucharest
Team leader: CSII Dr. Gabriela Paun
Partner 3: University of Agronomic Science and Veterinary Medicine Bucharest
Team leader: Lecturer Dr. Emanuel Vamanu

Rezultate etapa I/2012
Pe măsura descoperirii efectelor probiotice ale bacteriilor lactice, înţelegerea profundă a mecanismelor care stau la baza acestor efecte benefice a devenit o necesitate în special datorită faptului că aceste efecte sunt tulpină specifice. Pentru atingerea obiectivelor propuse în cadrul proiectului, în prima etapă a fost obţinuta o minicolecţie de 224 tulpini nou izolate de bacterii lactice din nișe ecologice specifice, caracterizarea acestora şi încadrarea taxonomică preliminară.
Sursele de izolare au fost foarte variate şi au acoperit un larg spectru ecologic, fiind reprezentate de: fecale de nou-născut, lapte, produse alimentare fermentate şi vegetale fermentate. Pentru caracterizarea şi încadrarea taxonomică preliminară tulpinile izolate şi purificate au fost analizate din punct de vedere morfologic (aspect microscopic şi macroscopic), fiziologic (creşterea la diferite valori de temperatură și halotoleranța) şi biochimic (producerea de catalază, producerea de acizi organici, capacitatea de metabolizare a diferitelor surse de carbon). Ulterior, pentru confirmarea statutului taxonomic, aceste tulpini au fost analizate cu ajutorul kiturilor standardizate API şi a sistemului BIOLOG.
S-a semnalat prezenţa unor variaţii în ceea ce priveşte particularităţile morfofiziologice şi biochimice ale tulpinilor izolate în funcţie de provenienţă. Din punct de vedere al morfologiei celulare, tulpinile izolate din produsele fermentate se prezintă în general sub formă de coci, iar cele din fecale prezintă preponderent bacilare sau cocobacilare. În ceea ce privește caracteristicile fiziologice şi biochimice tulpinile izolate din tract digestiv uman au capacitate mai scăzută de biosinteză a acizilor organici şi rezistenţă mai scăzută la variaţii de temperatură comparativ cu cele din produsele fermentate.
În urma tuturor determinărilor microbiologice şi biochimice efectuate, tulpinile de bacterii lactice izolate au fost identificate ca aparţinând genurilor: Lactobacillus, Lactococcus, Enterococcus, Bifidobacterium, Streptococcus şi Pediococcus. În vederea continuării la nivel molecular a studiului privind efectul probiotic, tulpinile au fost crioconservate şi păstrate în colecţia Departamentului de Genetică a Facultăţii de Biologie.

Rezultate etapa II/2013
Principalul obiectiv al prezentei etape a constat în selectarea tulpinilor cu potenţial probiotic din minicolecţia de bacterii lactice izolate în etapa anterioară (224 tulpini), atât prin metode convenţionale, cât şi prin metodologii moderne. Cercetările au vizat: determinarea in vitro a siguranţei utilizării tulpinilor selectate ca probiotice pentru sănătatea umană; evaluarea calitativă şi cantitativă a activităţii antimicrobiene faţă de microorganisme enteropatogene; analiza interacţiunilor dintre tulpinile de bacterii lactice şi celule eucariote epiteliale; caracterizarea compuşilor biologic activi produşi şi testarea in vitro a rezistenţei tulpinilor de bacterii lactice în condiţii similare celor de la nivelul tractului gastrointestinal.
Un aspect deosebit de important analizat în această etapă a fost stabilirea măsurii în care tulpinile de bacterii lactice selectate nu afectează sănătatea umană şi corespund criteriilor ghidului FAO/WHO. Astfel, aproximativ 30% dintre tulpinile de bacterii lactice luate în studiu au prezentat activitate hemolitică redusă după 48h, ceea ce a condus la excluderea acestora din studiu. Datorită posibilităţii apariţiei fenomenelor de transfer al genelor de rezistenţă la antibiotice la alte tulpini patogene a fost analizat spectrul de sensibilitate la antibiotice. S-a constatat că majoritatea tulpinilor analizate prezintă sensibilitate la cloramfenicol şi rezistenţa la kanamicină. În plus, 50% dintre tulpini nu prezintă rezistenţă la antibiotice precum ampicilină, tetraciclină, eritromicină şi gentamicina, rezistenţă cunoscută ca fiind determinata de o serie de gene situate la nivelul unor elemente transpozabile sau plasmide.
Efectele benefice ale bacteriilor lactice se bazează pe sinteza de compuşi biologic activi, dintre care unii sunt esenţiali pentru acţiunea lor antimicrobiană. Analizele efectuate au evidenţiat faptul că majoritatea tulpinilor selectate prezintă activitate antimicrobiană faţă de tulpinile patogene implicate în producerea de infecţii gastrointestinale, pentru trei dintre acestea (tulpinile19.3, 41.2, 26.1) fiind corelată cu biosinteză de bacteriocine. Trebuie precizat că spectrul cel mai larg de activitate l-a prezentat bacteriocina izolată de la tulpina 19.3. În privinţa capacităţii de sinteză a altor compuşi activi deosebit de importanţi precum sunt acizii organici, cercetările au arătat că toate tulpinile de bacterii lactice prezintă concentraţii ridicate de acid lactic şi acid acetic. O singură tulpina (34.1) biosintetizează o gamă largă de acizi organici (acid butiric, acid fenillactic, acid hidroxifenilllactic, acid succinic, acid malic şi acid formic).
Un criteriu de selecţie al tulpinilor probiotice este reprezentat de evaluarea capacităţii acestora de a adera şi de a interacţiona cu celulele organismului gazdă, ceea ce permite microorganismelor de tip probiotic să colonizeze tractului digestiv şi să-şi exercite efectele benefice pentru o perioadă mai lungă de timp. Sudiile efectuate pe linia celulară HTC-8 au arătat că tulpinile izolate de la nivelul tractului digestiv au o capacitate mai ridicată de aderenţă comparativ cu cele izolate din produse fermentate. De asemenea, majoritatea tulpinilor nu au manifestat efect citotoxic şi nu au indus modificări morfologice celulelor epiteliale.
Tulpinile de bacterii lactice trebuie, în plus să reziste condiţiilor mediului gastrointestinal. Din această cauză pe lângă analiza rezistenţei la diferite valori de pH, săruri biliare şi enzime digestive, tulpinile selectate au fost testate într-un sistem unicameral de simulare gastrointestinală (GIS1). Rezulatele au dovedit că rezistenţa la condiţiile tractului digestiv, este dependentă de tulpină, dar şi de condiţiile existente la nivelul fiecărui segment al tractului digestiv.
În concluzie, obiectivele propuse în cadrul acestei etape au fost în totalitate îndeplinite, iar o parte dintre rezultatele obţinute au fost incluse în 3 articole publicate în reviste indexate ISI. Trebuie menţionat că sistemul utilizat pentru testarea rezistenţei tulpinilor de bacterii lactice la condiţiile tractului gastrointestinal, realizat de partenerul P3 –USAMVB prin Prof. Dr. Emanuel Vamanu a căpătat recunoaşterea internaţională prin câştigarea medaliei de aur la Salonul internaţional de invenţii 2013 de la Geneva.

Rezultate etapa III/2014
Pentru utilizarea optimă a microorganismelor probiotice este necesară înţelegerea mecanismelor prin care acestea acţionează în vederea potenţării efectelor benefice exercitate de acestea asupra organismului gazdă. Tulpinile de microorganisme din produsele probiotice trebuie să îmbunătăţească starea de sănătate a organismului gazdă, fără a modifica însă homeostazia intestinală, ceea ce impune testarea riguroasă a tulpinilor înainte de includerea lor într-un produs probiotic.
Pentru atingerea obiectivului major al acestei etape, respectiv obţinerea unor consorţii de bacterii lactice cu efect probiotic, au fost continuate o serie de activităţi începute în anul 2013 şi s-au efectuat analize preliminare pentru testele ce vor fi finalizate în 2015. În cadrul acestei etape s-au derulat următoarele activităţi: analiza interacţiunii bacteriilor lactice cu microorganismele patogene şi anumite linii celulare, efectul imunomodulator al tulpinilor de bacterii lactice/fracţiilor microbiene, analiza compuşilor biologic activi şi determinarea rezistenţei tulpinilor la tranzitul prin tractul gastrointestinal uman, influenţa condiţiilor de creştere asupra biosintezei compuşilor cu acţiune antimicrobiană, evaluarea inhibiţiei de creştere între microorganismele din consorţii, evaluarea unui potenţial sinergism în ceea ce priveşte efectele benefice ale tulpinilor de bacterii lactice de la nivelul consorţiilor, influenţa tulpinilor microbiene care vor intra în consorţiu asupra microbiotei umane simulate în sistemele GIS1 şi analiza din punct de vedere chimic a probelor prelevate din sistemele GIS1. Rezultatele obţinute au condus la realizarea unor consorţii constituite din tulpinile de bacterii lactice selectate, care vor face obiectul analizelor ulterioare în vederea stabilirii consorţiului optim din punct de vedere al efectului probiotic.
Obiectivele propuse în cadrul prezentei etape au fost complet realizate şi o parte din rezultatele obţinute în cadrul acestei etape, precum şi în etapele anterioare au fost incluse în 4 articole publicate în reviste indexate ISI, 3 articole publicate in reviste indexate în baze de date internationale şi în 6 prezentări la congrese/simpozioane internaţionale şi publicate în rezumat.

Results phase I/2012
Discovery of lactic acid bacteria strain probiotic effect determined during last years the need for understanding the mechanisms involved in the beneficial impact on human health especially because these effects are strain specific. In order to achieve the project’s objectives, the first phase aimed to obtain a mini-collection of 224 new lactic acid bacteria strains isolated from specific ecological niches, their characterization and preliminary taxonomic classification.
The sources of isolation were varied and covered a broad ecological spectrum, represented by: newborn feces, milk, fermented food and fermented vegetable. In order to characterize and to identify, newly isolated and purified lactic acid bacteria strains were analyzed in terms of morphology (macroscopic or microscopic appearance), physiology (growth at various temperatures and halotolerance) and biochemical traits (catalase production, organic acids production, capacity to metabolize different carbon sources). Subsequently, to confirm the taxonomic status, strains were analyzed using standardized API kits and BIOLOG system.
The results have shown variations in morpho-physiological and biochemical traits of the isolates according to isolation niche. In terms of cell morphology, strains isolated from fermented products are generally cocci and strains isolated from newborn feces presented mainly the bacillary and coccobacillary forms. Strains from human gastrointestinaly tractus have lower capacity for biosynthesis of organic acids and low resistance to temperature changes compared with strains isolated from fermented products. After all microbiological and biochemical determinations carried out, newly isolated lactic acid bacteria strains were identified as belonging to the genera Lactobacillus, Lactococcus, Enterococcus, Bifidobacterium, Streptococcus and Pediococcus.
All isolated and characterized strains were cryopreserved and stored in the collection of the Department of Genetics, Faculty of Biology.
  
Results phase II/2013
The main objective of this phase was to select the lactic acid bacteria (LAB) strains with probiotic potential from the stock of newly isolated strains (224 strains) using conventional and modern methodology.
The studies focused on: in vitro determination of the safety use as probiotics for human health of the selected strains; qualitative and quantitative evaluation of the antimicrobial activity against enteropathogenic microorganisms; analysis of the interactions between lactic acid bacteria strains and eukaryotic epithelial cells; characterization of the biologically active compounds produced by LAB strains  and in vitro testing of the resistance of LAB strains under conditions similar to those of the gastrointestinal tract.
An important analyzed aspect was to establish if the selected strains does not affect human health and comply with FAO/WHO guide criteria. 30% of the studied LAB strains showed reduced hemolytic activity after 48 hours and its were excluded from the study. Due to the risk of the antibiotic resistance gene transfer to pathogenic strains, LAB strains were tested in order to determine the antibiotic sensitivity spectrum. It has been found that the majority of the analyzed strains presented sensitivity to chloramphenicol and resistance to kanamycin. In addition, 50% of the strains presented no resistance to antibiotics such as ampicillin, tetracycline, erythromycin and gentamicin, resistance known to be determined by a number of genes located in transposable elements or plasmids.
Some of the benefic effects of lactic acid bacteria are based on the synthesis of biologically active compounds such as compounds with antimicrobial activity. The results revealed that the majority of the selected strains show antimicrobial activity against pathogenic strains involved in production of gastrointestinal infections, for three of them (strains 19.3, 41.2, 26.1) this activity had been correlated with the biosynthesis of bacteriocins. It should be noted that the broadest spectrum of activity was presented by the bacteriocin isolated from strain 19.3. 
Regarding the LAB strains capacity for synthesis of important active compounds such as organic acids our analysis had shown that all strains of lactic acid bacteria presented high concentrations of lactic and acetic acid. Only one strain (34.1) biosynthesizes a broad range of organic acids (butyric acid, fenillactic acid, hidroxifenilllactic acid, succinic acid, malic acid and formic acid).
A criteria for the selection of probiotic strains is the assessment of their ability to adhere and interact with the host cells, allowing probiotic microorganisms to colonize the digestive tract and to perform their beneficial effects for a longer period of time. The studies carried out on cell line HTC-8 had shown that the LAB strains isolated from the digestive tract have a high capacity of adherence compared to the ones obtained from fermentated products. The majority of strains showed no cytotoxic effects and did not induced morphological changes of the epithelial cells.
Withal, the strains of lactic acid bacteria must withstand to the environmental conditions of the gastrointestinal tract. For this reason, the selected strains were tested in a unicameral system for gastrointestinal simulation (GIS1) in order to establish the resistance to different pH values, bile salts and digestive enzymes. The results showed that the resistance to digestive tract conditions depends on strain and on the conditions existing at each level of the digestive tract.
In conclusion, all the objectives of this stage were fully accomplished and some of the results were included in three articles published in ISI quoted journals.
It should be noted that the system used for testing the resistance of the lactic acid bacteria strains in the gastrointestinal tract conditions, developed by partner P3-USAMVB (team leader Professor Dr. Emanuel Vamanu) gained international recognition by winning the gold medal at the International Exhibition of Inventions, Geneva, 2013.

Results phase III/2014
In order to increase the beneficial effects of the probiotic microorganisms over the host organism and for an optimal use of such microbes, accurate understanding of their action mechanisms is needed. Thus, microbial strains from probiotic products should improve the health state of the host organism without changing the intestinal homeostasis; this in turn, requires rigorous testing of the microbial strains prior to include them in a potential probiotic product.
To attain the major aim of this step of the PROLAB project, that is obtaining of lactic bacteria consortia with probiotic effect, we have continued several research activities started in 2013 and we have also performed preliminary analyses that will be completed in 2015. The main research activities performed in this stage were: analyses of the interactions between lactic bacterial strains and human cell lines, respectively; analyses on the immunomodulating effect of the lactic bacterial strains / microbial fractions; analyses of the active biological compounds and microbial resistance to the transit through the human gastro-intestinal tractum; growth conditions influence upon the biosynthesis of antimicrobial compounds; evaluation of the growth inhibition between microbial strains within the consortia; evaluation of a potential synergism of the lactic bacteria beneficial effects as consortia; influence of the microbial strains to be used in consortia upon the human microbiota simulated in GIS1 system and chemical analyses of samples collected from GIS1. Our scientific results have lead to several microbial consortia consisting in selected lactic bacterial strains, that will be further analyzed in order to complete the final composition of the consortium having an optimal probiotic effect.

The aims proposed for this project stage have been completely attained and results have been included in 4 papers published in ISI journals, 3 papers published in IDB journals and, respectively, in presentations to international congresses / symposia, published as abstracts.

Publicatii stiintifice:
Etapa I - 2012
  1. Grosu – Tudor S.S., Zamfir M., 2012, “Functional properties of lactic acid bacteria isolated from Romanian fermented vegetables”, II International Conference on Antimicrobial Research, Lisabona, Portugalia, 21-23 noiembrie 2012, p. 563.
Etapa II - 2013
  1. Grosu-Tudor S.S., Zamfir M., Van der Meulen R., De Vuyst L., 2013, Isolation of novel homopolysaccharide-producing lactic acid bacteria from Romanian raw milk and fermented dairy products, European Food Research and Technology 237:609-615.
  2. Vamanu E., 2013, Testing in vitro viability of thermophilic probiotic strain in simulated gastrointestinal conditions,  Annals of Microbiology DOI 10.1007/s13213-013-0734-6.
  3. Vamanu E., Pelinescu D.R., Avram I., Nita S., 2013, An in-vitro evaluation of antioxidant and colonic microbial profile levels following mushroom consumption, BioMed Research International http://dx.doi.org/10.1155/2013/289821
Etapa III - 2014
Articole in reviste ISI

  1. Grosu-Tudor S.-S., Stancu M.-M., Pelinescu D.,  Zamfir M., 2014, Characterization of some bacteriocins produced by lactic acid bacteria isolated from fermented foods, World Journal of Microbiology and Biotechnology 30, p. 2459–2469.
  2. Vamanu E., Sarbu I., Nedelcu I., Pelinescu D., 2014, Study of PROEXO product influence on infant microbiota in an in vitro colonic fermentation system, Annals of Microbiology, http://link.springer.com/article/10.1007/s13213-014-0947-3
  3. Ditu L. M., Chifiriuc M. C., Pelinescu D., Sarbu I., Pircalabioru G., Mihaescu G., 2014, Class I and II Bacteriocins: Structure, Biosynthesis and Drug Delivery Systems for the Improvement of their Antimicrobial Activity, Current Proteomics  11, p. 121-127.
  4. Gatea F., Teodor E., Paun G., Matei A., Radu G. L., 2014, Capillary Electrophoresis Method Validation for Organic Acids Assessment in Probiotics, Food Analytical Method , http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs12161-014-0018-1
Articole in reviste BDI

  1. Ditu L.M., Chifiriuc M. C.,  Marutescu L.,  Bleotu C.,  Pelinescu D.,  Bezirtzoglou E., Mihaescu G., Lazar V., 2014, Immunomodulatory effect of non-viable components of probiotic culture stimulated with heat-inactivated Escherichia coli and Bacillus cereus on holoxenic mice, Microbial Ecology In Health & Disease 25, p.1-6.
  2. Ditu L. M., Chifiriuc M.C., Pelinescu D., Sarbu I., Lazar V., Mihaescu G., 2014, Two-Component Regulatory Systems – implication in the quorum sensing mechanisms and bacteriocin production in lactic acid bacteria, Biointerface Research in Applied Chemistry  4(4), p. 813-815.
  3. Zamfir M., Cornea P.C., De Vuyst L., Grosu-Tudor S.-S., 2014, Biodiversity and biotechnological potential of lactic acid bacteria, AgroLife Scientific Journal 3(1), p. 169-176.
Prezentari la conferinte

  1. Grosu-Tudor S.-S., Stancu M.-M., Pelinescu D.,  Zamfir M., 2014, Characterization of some bacteriocins produced by lactic acid bacteria isolated from fermented foods, 11th Symposium on Lactic Acid Bacteria, Egmond Aan Zee/Olanda, 31august-04 septembrie
  2. Sarbu I., Vassu T., Stoica  I., Marutescu L., Chifiriuc C., Nedelcu I., Pelinescu D., 2014, The influence of lactic acid bacteria strains on the antifungal resistance mechanisms of Candida albicans strains, 11th Symposium on Lactic Acid Bacteria, Egmond Aan Zee/Olanda, 31august-04 septembrie
  3. Sarbu I.,  Tanase A.M., Zamfir M.,  Vassu T., Stoica I., Chifiriuc C.M., Ionescu R., Pelinescu D., 2014, Screening for antimicrobial activity of lactic acid bacteria strains isolated from different Romanian food products, 3rd International Conference on Clinical Microbiology and Microbial Genomics, Valencia/Spania, 24-26 septembrie
  4. Sarbu I., Ionescu R. Vassu T., Stoica I., Ditu L.M., Marutescu L., Chifiriuc C.M., Petrut S., Pelinescu D., 2014, Study of some lactic acid bacteria strains probiotic effect  for use in gastrointestinal infections, 3rd International Conference on Clinical Microbiology and Microbial Genomics, Valencia/Spania, 24-26 septembrie
  5. Chifiriuc M.C., Marutescu L., Ionescu B., Ionescu D., Gheorghe I., Czobor I., Mihaescu G., Lazar V., 2014, Flow cytometry characterisation of gram positive and gram negative bacterial strains exhibiting non-enzymatic and enzymatic resistance mechanisms, 14TH EUROCONFERENCE ON CLINICAL CELL ANALYSIS, Lisabona, Portugalia, 13 -18 septembrie 2014.
  6. Zamfir M., Cornea P.C., De Vuyst L., Grosu-Tudor S.-S., 2014, Biodiversity and biotechnological potential of lactic acid bacteria, International Conference "Agriculture for Life, Life for Agriculture, Bucuresti/Romania, 5-7 iunie – prezentare orala

Premii:
Partener USAMVB - autor Emanuel Vamanu
Medalie de aur - Salonul Internaţional de Invenţii de la Geneva (ELVEŢIA 2013)  GIS1 – Sistem unicameral de simulare in vitro a tractului gastrointestinal uman
  
Scientific publications:
Phase I - 2012
  1. Grosu – Tudor S.S., Zamfir M., 2012, “Functional properties of lactic acid bacteria isolated from Romanian fermented vegetables”, II International Conference on Antimicrobial Research, Lisabona, Portugalia, 21-23 noiembrie 2012, p. 563.
Phase II - 2013
  1. Grosu-Tudor S.S., Zamfir M., Van der Meulen R., De Vuyst L., 2013, Isolation of novel homopolysaccharide-producing lactic acid bacteria from Romanian raw milk and fermented dairy products, European Food Research and Technology 237:609-615.
  2. Vamanu E., 2013, Testing in vitro viability of thermophilic probiotic strain in simulated gastrointestinal conditions,  Annals of Microbiology DOI 10.1007/s13213-013-0734-6.
  3. Vamanu E., Pelinescu D.R., Avram I., Nita S., 2013, An in-vitro evaluation of antioxidant and colonic microbial profile levels following mushroom consumption, BioMed Research International http://dx.doi.org/10.1155/2013/289821
Phase III - 2014
ISI journals

  1. Grosu-Tudor S.-S., Stancu M.-M., Pelinescu D.,  Zamfir M., 2014, Characterization of some bacteriocins produced by lactic acid bacteria isolated from fermented foods, World Journal of Microbiology and Biotechnology 30, p. 2459–2469.
  2. Vamanu E., Sarbu I.Nedelcu I., Pelinescu D., 2014, Study of PROEXO product influence on infant microbiota in an in vitro colonic fermentation system, Annals of Microbiology, http://link.springer.com/article/10.1007/s13213-014-0947-3
  3. Ditu L. M., Chifiriuc M. C., Pelinescu D., Sarbu I., Pircalabioru G., Mihaescu G., 2014, Class I and II Bacteriocins: Structure, Biosynthesis and Drug Delivery Systems for the Improvement of their Antimicrobial Activity, Current Proteomics  11, p. 121-127.
  4. Gatea F., Teodor E., Paun G., Matei A., Radu G. L., 2014, Capillary Electrophoresis Method Validation for Organic Acids Assessment in Probiotics, Food Analytical Method , http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs12161-014-0018-1
IDB journals

  1. Ditu L.M., Chifiriuc M. C.,  Marutescu L.,  Bleotu C.,  Pelinescu D.,  Bezirtzoglou E., Mihaescu G., Lazar V., 2014, Immunomodulatory effect of non-viable components of probiotic culture stimulated with heat-inactivated Escherichia coli and Bacillus cereus on holoxenic mice, Microbial Ecology In Health & Disease 25, p.1-6.
  2. Ditu L. M., Chifiriuc M.C., Pelinescu D., Sarbu I., Lazar V., Mihaescu G., 2014, Two-Component Regulatory Systems – implication in the quorum sensing mechanisms and bacteriocin production in lactic acid bacteria, Biointerface Research in Applied Chemistry  4(4), p. 813-815.
  3. Zamfir M., Cornea P.C., De Vuyst L., Grosu-Tudor S.-S., 2014, Biodiversity and biotechnological potential of lactic acid bacteria, AgroLife Scientific Journal 3(1), p. 169-176.
Congress presentations

  1. Grosu-Tudor S.-S., Stancu M.-M., Pelinescu D.,  Zamfir M., 2014, Characterization of some bacteriocins produced by lactic acid bacteria isolated from fermented foods, 11th Symposium on Lactic Acid Bacteria, Egmond Aan Zee/Olanda, 31august-04 septembrie
  2. Sarbu I., Vassu T., Stoica  I., Marutescu L., Chifiriuc C., Nedelcu I., Pelinescu D., 2014, The influence of lactic acid bacteria strains on the antifungal resistance mechanisms of Candida albicans strains, 11th Symposium on Lactic Acid Bacteria, Egmond Aan Zee/Olanda, 31august-04 septembrie
  3. Sarbu I.,  Tanase A.M., Zamfir M.,  Vassu T., Stoica I., Chifiriuc C.M., Ionescu R., Pelinescu D., 2014, Screening for antimicrobial activity of lactic acid bacteria strains isolated from different Romanian food products, 3rd International Conference on Clinical Microbiology and Microbial Genomics, Valencia/Spania, 24-26 septembrie
  4. Sarbu I., Ionescu R. Vassu T., Stoica I., Ditu L.M., Marutescu L., Chifiriuc C.M., Petrut S., Pelinescu D., 2014, Study of some lactic acid bacteria strains probiotic effect  for use in gastrointestinal infections, 3rd International Conference on Clinical Microbiology and Microbial Genomics, Valencia/Spania, 24-26 septembrie
  5. Chifiriuc M.C., Marutescu L., Ionescu B., Ionescu D., Gheorghe I., Czobor I., Mihaescu G., Lazar V., 2014, Flow cytometry characterisation of gram positive and gram negative bacterial strains exhibiting non-enzymatic and enzymatic resistance mechanisms, 14TH EUROCONFERENCE ON CLINICAL CELL ANALYSIS, Lisabona, Portugalia, 13 -18 septembrie 2014.
  6. Zamfir M., Cornea P.C., De Vuyst L., Grosu-Tudor S.-S., 2014, Biodiversity and biotechnological potential of lactic acid bacteria, International Conference "Agriculture for Life, Life for Agriculture, Bucuresti/Romania, 5-7 iunie – prezentare orala

 AWARD:
Partner USAMVB - author Emanuel Vamanu
Gold medal - Exhibition of Inventions  Geneva (Switzerland 2013)  GIS1 system – Single chamber system for in vitro simulation of the human gastrointestinal tract

 .